Disputado entre los días 25 y 27 de agosto a partido único, aquí están los resultados de la primera ronda de la Copa del Rey de futbol de la temporada 2009 – 2010.
| Local | Visitante | |
|---|---|---|
| CD San Roque | 1 – 2 | UD Melilla |
| Villajoyosa CF | 2 – 0 | UD Logroñés |
| CD Lagun Onak | 2 – 1 | CD Izarra |
| SD Ponferradina | 1 – 1 (5 – 4) | SD Eibar |
| SD Lemona | 2 – 2 (2 – 4) | Cultural Leonesa |
| UB Conquense | 1 – 0 (pr.) | CD Toledo |
| RSD Alcalá | 0 – 1 | Real Oviedo |
| UD Puertollano | 3 – 1 (pr.) | Gimnástica de Torrelavega |
| SD Tenisca | 2 – 4 | AD Cerro de Reyes Atlético |
| UDA Gramenet | 0 – 3 | UE Sant Andreu |
| SD Compostela | 1 – 2 | Zamora CF |
| CE Sabadell | 2 – 0 | Atlético Monzón |
| Alicante CF | 1 – 1 (5 – 4) | Sporting Mahonés |
| Real Jaén | 0 – 1 | Unión Estepona |
| CD Leganés | 1 – 3 | CF Reus Deportiu |
| UD Marbella | 1 – 0 | Caravaca CF |
| Deportivo Alavés | 1 – 1 (1 – 4) | CF Palencia |
| Lorca Deportiva | 1 – 2 (pr.) | AD Ceuta |